Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm間距電擊杯用戶指南

——精準電轉(zhuǎn)化，助力基因編輯與細胞工程

一、產(chǎn)品概述

Bio-Rad 1652092 Biorad 0.2cm間距電擊杯（MicroPulser Electroporation Cuvettes）是專為高場強電穿孔設(shè)計的實驗室耗材，適用于酵母、細菌及其他真核細胞的基因?qū)肱c編輯。其核心優(yōu)勢包括高轉(zhuǎn)化效率、無菌保障及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，廣泛應用于分子生物學、合成生物學及藥物研發(fā)領(lǐng)域。

二、技術(shù)參數(shù)

三、核心功能與優(yōu)勢

1. 高轉(zhuǎn)化效率

• 窄間距設(shè)計：0.2 cm間距產(chǎn)生高場強，顯著提升外源DNA/RNA的細胞攝取率。

• 精準公差控制：電極間距誤差極小，確保實驗結(jié)果的可重復性。

2. 無菌保障

• 凈室生產(chǎn)：裝配、洗滌、加蓋、包裝全流程在凈室完成，避免污染。

• Gamma射線滅菌：獨立包裝，開袋即用，無需額外滅菌步驟。

3. 結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性

• 耐高壓聚碳酸酯：可承受電穿孔儀的高電壓脈沖，避免擊穿或泄漏。

• 無縫模制腔體：避免滲漏，確保鋁板平行，保障脈沖均勻性。

4. 操作便捷性

• 顏色編碼蓋帽：綠色標識0.2 cm間距，便于快速區(qū)分不同規(guī)格電擊杯。

• 平滑電極表面：11步蝕刻處理，確保脈沖傳送一致性，減少細胞損傷。

四、操作指南

（一）實驗前準備

1. 設(shè)備檢查

• 確認電穿孔儀（如Gene Pulser Xcell）與電擊杯型號匹配。

• 檢查電擊杯包裝完整性，避免使用已開封或損壞的產(chǎn)品。

2. 細胞處理

• 制備感受態(tài)細胞（如酵母、細菌），濃度建議為1–10×10?細胞/mL。

• 加入目的DNA（如質(zhì)粒），混勻后冰浴5分鐘。

3. 電擊杯預冷

• 將電擊杯插入冰中預冷5分鐘，減少電轉(zhuǎn)過程中的熱損傷。

（二）電穿孔操作

1. 樣品加載

• 用200 μL槍頭（切除0.5 cm）將細胞-DNA混合物緩慢注入電擊杯，避免氣泡。

• 立即蓋上杯蓋，確保密封性。

2. 參數(shù)設(shè)置

• 酵母：電壓170 V，電容950 μF，電轉(zhuǎn)液100 μL。

• 細菌：電壓150 V，電容950 μF，電轉(zhuǎn)液100 μL。

• 哺乳動物細胞（需優(yōu)化）：電壓80–160 V，電容800–1000 μF。

• 根據(jù)細胞類型選擇參數(shù)（示例）：

3. 電擊與復蘇

• 將電擊杯放入電穿孔儀，啟動脈沖。

• 電擊后立即加入預冷培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至離心管中復蘇。

（三）實驗后處理

1. 電擊杯清潔

• 用去離子水或70%乙醇沖洗內(nèi)腔，避免細胞碎片殘留。

• 重復使用可能導致轉(zhuǎn)化效率下降，建議單次使用后丟棄。

2. 細胞培養(yǎng)

• 根據(jù)細胞類型選擇復蘇條件（如37℃培養(yǎng)箱、抗生素篩選）。

• 孵育12–48小時后，檢測基因表達或編輯效率。

五、典型應用場景

1. 基因編輯

• CRISPR/Cas9：通過電穿孔將sgRNA與Cas9質(zhì)粒導入酵母或細菌，實現(xiàn)基因敲除或敲入。

• 同源重組：結(jié)合供體DNA（donor DNA），進行高精度基因編輯。

2. 細胞工程

• 重組蛋白表達：將外源基因?qū)虢湍富蚣毦?，生產(chǎn)治療性蛋白。

• 干細胞轉(zhuǎn)染：優(yōu)化參數(shù)后，用于哺乳動物細胞的基因?qū)搿?/p>

3. 合成生物學

• 代謝通路改造：通過電穿孔導入多基因質(zhì)粒，構(gòu)建高效代謝工程菌株。

六、注意事項

1. 無菌操作

• 電擊杯開蓋后需立即使用，避免暴露于空氣中過久。

• 使用后需按制造商說明清潔消毒，防止交叉污染。

2. 參數(shù)優(yōu)化

• 不同細胞類型需調(diào)整電壓、電容及電轉(zhuǎn)液體積。

• 建議參考Bio-Rad參數(shù)表或文獻進行優(yōu)化。

3. 設(shè)備兼容性

• 確認電穿孔儀支持0.2 cm間距電擊杯（如Gene Pulser系列）。

• 避免使用非兼容設(shè)備，以免損壞電擊杯或儀器。

4. 儲存條件

• 未開封電擊杯可室溫儲存，避免高溫或潮濕環(huán)境。

• 已開封電擊杯需立即使用，或密封保存于4℃。