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DP117 - Li - cor Revert™總蛋白染色試劑用戶指南

更新時(shí)間:2025-04-27      點(diǎn)擊次數(shù):583
DP117 - Li - cor Revert™總蛋白染色試劑用戶指南
產(chǎn)品概述
DP117 - Li - cor Revert™總蛋白染色試劑是一款專為科研工作者設(shè)計(jì)的高性能蛋白染色產(chǎn)品。它基于先進(jìn)的近紅外熒光技術(shù),能夠?qū)郾0纺z上的總蛋白進(jìn)行高效、靈敏且穩(wěn)定的染色。在蛋白質(zhì)組學(xué)研究、免疫印跡分析等諸多科研領(lǐng)域,準(zhǔn)確地檢測和分析總蛋白的分布與含量至關(guān)重要,而該試劑憑借其性能,為科研人員提供了可靠的解決方案。
技術(shù)原理
DP117 - Li - cor Revert™試劑中的活性成分能夠特異性地與蛋白質(zhì)分子中的特定官能團(tuán)結(jié)合。這種結(jié)合主要通過靜電相互作用、氫鍵以及疏水作用等多種分子間作用力實(shí)現(xiàn)。當(dāng)試劑與蛋白質(zhì)結(jié)合后,在近紅外光的激發(fā)下,結(jié)合了試劑的蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)射出特定波長的熒光信號(hào)。近紅外熒光技術(shù)具有顯著優(yōu)勢,相較于傳統(tǒng)的可見光染色,近紅外光在生物樣品和凝膠介質(zhì)中具有更低的散射和自發(fā)熒光干擾,從而能夠提供更高的信噪比和更清晰的蛋白條帶成像,使科研人員能夠更準(zhǔn)確地識(shí)別和分析蛋白質(zhì)條帶。
產(chǎn)品特點(diǎn)
  1. 高靈敏度:能夠檢測到低至納克級(jí)別的蛋白質(zhì),可清晰分辨出不同含量的蛋白質(zhì)條帶,對(duì)于微量蛋白樣品的分析尤為適用,為蛋白質(zhì)組學(xué)研究中對(duì)低豐度蛋白的檢測提供了有力工具。

  1. 寬動(dòng)態(tài)范圍:可同時(shí)準(zhǔn)確檢測出樣品中含量差異較大的多種蛋白質(zhì),從高豐度蛋白到低豐度蛋白均能呈現(xiàn)出良好的線性響應(yīng),適用于復(fù)雜蛋白質(zhì)混合物的分析,無需對(duì)樣品進(jìn)行繁瑣的分級(jí)或預(yù)富集處理。

  1. 快速染色:相比一些傳統(tǒng)的總蛋白染色方法,如考馬斯亮藍(lán)染色需要數(shù)小時(shí)甚至過夜,DP117 - Li - cor Revert™試劑能夠在較短時(shí)間內(nèi)完成染色過程,通常在 [X] 分鐘內(nèi)即可觀察到清晰的蛋白條帶,大大提高了實(shí)驗(yàn)效率。

  1. 穩(wěn)定性好:染色后的凝膠在較長時(shí)間內(nèi)熒光信號(hào)穩(wěn)定,不易發(fā)生褪色現(xiàn)象。這使得科研人員有充足的時(shí)間對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察、拍照記錄以及后續(xù)的數(shù)據(jù)分析,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。

  1. 兼容性強(qiáng):該試劑與常見的聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)(如 SDS - PAGE)兼容,無論是不同濃度的分離膠還是濃縮膠,都能取得理想的染色效果。同時(shí),它也適用于多種蛋白質(zhì)樣品制備方法,包括不同來源的細(xì)胞裂解液、組織勻漿等。

  1. 操作簡便:整個(gè)染色流程簡單直接,無需復(fù)雜的儀器設(shè)備和專業(yè)的化學(xué)操作技能。只需按照標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟進(jìn)行染色、洗滌等處理,即可獲得高質(zhì)量的染色結(jié)果,降低了實(shí)驗(yàn)操作的難度和出錯(cuò)概率。

使用方法
染色前準(zhǔn)備
  1. 凝膠準(zhǔn)備:完成蛋白質(zhì)樣品的聚丙烯酰胺凝膠電泳后,小心取出凝膠,放入合適的染色容器中。建議使用塑料或玻璃制的染色盒,避免使用金屬容器,以防金屬離子對(duì)染色反應(yīng)產(chǎn)生干擾。用去離子水或適當(dāng)?shù)木彌_液輕輕漂洗凝膠 1 - 2 次,每次漂洗時(shí)間約為 [X] 分鐘,以去除凝膠表面殘留的電泳緩沖液和雜質(zhì),但注意不要過度漂洗導(dǎo)致蛋白質(zhì)條帶損失。

  1. 試劑準(zhǔn)備:從冰箱中取出 DP117 - Li - cor Revert™總蛋白染色試劑,使其在室溫下平衡一段時(shí)間(約 [X] 分鐘),以避免因溫度差異導(dǎo)致試劑在使用過程中出現(xiàn)沉淀或其他不穩(wěn)定現(xiàn)象。在使用前,輕輕搖勻試劑瓶,確保試劑均勻混合。根據(jù)凝膠的大小和數(shù)量,按照每平方厘米凝膠面積使用 [X] mL 染色試劑的比例,準(zhǔn)確量取所需的染色試劑體積,倒入干凈的容器中備用。

  1. 其他材料準(zhǔn)備:準(zhǔn)備適量的洗滌緩沖液,一般可使用含 0.1% Tween - 20 的 PBS 緩沖液(pH 7.4)。同時(shí),準(zhǔn)備好干凈的濾紙、鑷子等實(shí)驗(yàn)工具,用于后續(xù)操作過程中的凝膠轉(zhuǎn)移和吸干多余液體。

染色步驟
  1. 染色反應(yīng):將準(zhǔn)備好的染色試劑緩慢倒入裝有凝膠的染色容器中,確保凝膠浸沒在染色試劑中,且染色試劑均勻覆蓋凝膠表面。為了保證染色均勻性,可將染色容器置于水平搖床上,設(shè)置低速(約 [X] rpm)振蕩,在室溫下進(jìn)行染色反應(yīng)。染色時(shí)間根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和樣品情況而定,一般情況下,染色 [X] 分鐘即可觀察到初步的蛋白條帶,但對(duì)于一些復(fù)雜樣品或需要更高靈敏度的實(shí)驗(yàn),可適當(dāng)延長染色時(shí)間至 [X] 分鐘。在染色過程中,可觀察到凝膠上的蛋白質(zhì)條帶逐漸顯現(xiàn)出熒光信號(hào)。

  1. 洗滌步驟:染色反應(yīng)結(jié)束后,小心倒去染色試劑。染色試劑可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)保規(guī)定進(jìn)行妥善處理,切勿隨意丟棄。然后,向染色容器中加入適量的洗滌緩沖液,將凝膠浸泡在洗滌緩沖液中,在水平搖床上以中速(約 [X] rpm)振蕩洗滌 [X] 次,每次洗滌時(shí)間為 [X] 分鐘。洗滌的目的是去除凝膠表面未結(jié)合的染色試劑,降低背景熒光信號(hào),提高蛋白條帶的清晰度和對(duì)比度。每次洗滌后,使用干凈的濾紙小心吸干凝膠表面多余的洗滌緩沖液,但注意不要刮傷凝膠。

結(jié)果觀察與分析
  1. 熒光成像:洗滌完成后,將凝膠置于近紅外熒光成像系統(tǒng)中進(jìn)行觀察和拍照。根據(jù)成像系統(tǒng)的操作說明,設(shè)置合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長,對(duì)于 DP117 - Li - cor Revert™試劑,激發(fā)波長一般在 [具體激發(fā)波長范圍],發(fā)射波長在 [具體發(fā)射波長范圍]。調(diào)整成像系統(tǒng)的曝光時(shí)間、增益等參數(shù),以獲得清晰、對(duì)比度良好的蛋白條帶圖像。確保成像環(huán)境光線較暗,避免環(huán)境光對(duì)熒光信號(hào)產(chǎn)生干擾。

  1. 條帶分析:使用專業(yè)的凝膠分析軟件對(duì)拍攝的圖像進(jìn)行分析。軟件可用于測量蛋白條帶的強(qiáng)度、分子量大小(通過與已知分子量的蛋白 Marker 條帶對(duì)比)以及計(jì)算不同條帶的相對(duì)含量等參數(shù)。在分析過程中,可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置合適的閾值和背景扣除參數(shù),以提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。將分析結(jié)果與實(shí)驗(yàn)預(yù)期進(jìn)行對(duì)比,判斷蛋白質(zhì)樣品的組成和表達(dá)情況,為后續(xù)的科研工作提供數(shù)據(jù)支持。

注意事項(xiàng)
  1. 試劑保存:DP117 - Li - cor Revert™總蛋白染色試劑應(yīng)避光保存于 4℃冰箱中。避免試劑受到光照、高溫或反復(fù)凍融,這些因素可能會(huì)導(dǎo)致試劑的活性降低,影響染色效果。在每次使用后,應(yīng)及時(shí)將試劑瓶蓋緊,放回冰箱保存。

  1. 安全防護(hù):在使用試劑過程中,需佩戴手套、護(hù)目鏡等防護(hù)裝備,避免試劑與皮膚和眼睛直接接觸。若不慎接觸到試劑,應(yīng)立即用大量清水沖洗,并根據(jù)具體情況及時(shí)就醫(yī)。試劑具有一定的化學(xué)腐蝕性,操作時(shí)應(yīng)在通風(fēng)良好的環(huán)境中進(jìn)行,避免吸入試劑揮發(fā)的氣體。

  1. 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化:不同的實(shí)驗(yàn)樣品和實(shí)驗(yàn)?zāi)康目赡苄枰獙?duì)染色條件進(jìn)行優(yōu)化。例如,對(duì)于某些特殊來源的蛋白質(zhì)樣品,可能需要調(diào)整染色時(shí)間、染色試劑濃度或洗滌次數(shù)等參數(shù),以獲得最佳的染色效果。在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)前,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),摸索出適合自己樣品的最佳實(shí)驗(yàn)條件。

  1. 凝膠質(zhì)量:凝膠的制備質(zhì)量對(duì)染色結(jié)果有重要影響。確保在制備聚丙烯酰胺凝膠時(shí),各試劑的比例準(zhǔn)確、混合均勻,凝膠聚合充分且無氣泡。電泳過程中,要保證電壓、電流穩(wěn)定,避免蛋白質(zhì)條帶出現(xiàn)拖尾、變形等異?,F(xiàn)象,以保證染色后的蛋白條帶能夠準(zhǔn)確反映樣品中蛋白質(zhì)的真實(shí)情況。

  1. 儀器校準(zhǔn):在使用近紅外熒光成像系統(tǒng)前,需對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn),確保儀器的波長準(zhǔn)確性、熒光強(qiáng)度測量準(zhǔn)確性等指標(biāo)符合要求。定期對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)和清潔,防止儀器內(nèi)部光學(xué)部件受到污染,影響成像質(zhì)量。同時(shí),要注意儀器的軟件版本是否為最新,及時(shí)更新軟件以獲得更好的分析功能和數(shù)據(jù)處理能力。

常見問題及解決方法
  1. 染色條帶不清晰或無條帶:可能原因一是染色時(shí)間過短,可適當(dāng)延長染色時(shí)間再次觀察;二是蛋白質(zhì)樣品上樣量過低,可增加上樣量并重做實(shí)驗(yàn);三是染色試劑失效,檢查試劑保存條件和有效期,若試劑已過期或保存不當(dāng),應(yīng)更換新的試劑。

  1. 背景熒光過高:可能是洗滌不充分,增加洗滌次數(shù)或延長洗滌時(shí)間;也可能是染色試劑濃度過高,可適當(dāng)降低染色試劑濃度,重新進(jìn)行染色實(shí)驗(yàn)。另外,確保實(shí)驗(yàn)過程中使用的容器和工具干凈無污染,避免引入雜質(zhì)導(dǎo)致背景升高。

  1. 條帶出現(xiàn)拖尾或變形:這可能是電泳過程中電壓不穩(wěn)定、凝膠制備不均勻或樣品存在雜質(zhì)等原因引起的。檢查電泳設(shè)備的電源穩(wěn)定性,優(yōu)化凝膠制備過程,確保凝膠均勻;對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行進(jìn)一步純化,去除雜質(zhì)后再進(jìn)行電泳和染色實(shí)驗(yàn)。



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