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CCK-8 細胞活力檢測試劑盒技術(shù)詳解

更新時間:2025-06-18      點擊次數(shù):839
CCK-8 細胞活力檢測試劑盒技術(shù)文章
(一)產(chǎn)品概述
CCK-8(Cell Counting Kit-8)細胞活力檢測試劑盒是一種基于 WST-8(水溶性四唑鹽)的高靈敏度、便捷的細胞活力檢測工具。試劑盒主要包含 CCK-8 溶液、細胞培養(yǎng)基、陽性對照品等組分。其中,CCK-8 溶液是核心試劑,WST-8 是一種類似于 MTT 的化合物,可被細胞內(nèi)的脫氫酶還原為水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物,該產(chǎn)物的生成量與活細胞數(shù)量成正比,通過測定其在特定波長下的吸光度,即可準確反映細胞活力。
(二)技術(shù)原理
CCK-8 檢測的原理基于細胞內(nèi)脫氫酶的活性。當 CCK-8 溶液加入到含有細胞的培養(yǎng)體系中時,WST-8 可穿透細胞膜進入細胞內(nèi)。活細胞中的線粒體脫氫酶能夠?qū)?WST-8 還原為橙黃色的甲臜,而死細胞由于缺乏活性的脫氫酶,無法進行該還原反應。在 450nm 波長處測定甲臜產(chǎn)物的吸光度,其吸光度值與活細胞數(shù)量呈良好的線性關(guān)系。通過建立標準曲線,即可根據(jù)吸光度值準確計算出細胞活力和細胞數(shù)量。與傳統(tǒng)的 MTT 法相比,CCK-8 法生成的甲臜產(chǎn)物水溶性好,無需裂解細胞,避免了操作過程中因細胞裂解不等因素導致的誤差,使檢測結(jié)果更加準確、穩(wěn)定 。
(三)應用領(lǐng)域與實際案例
  1. 藥物研發(fā):在新藥篩選和藥物毒性評估中,CCK-8 細胞活力檢測試劑盒被廣泛應用。例如,在抗腫瘤藥物研發(fā)過程中,科研人員將不同濃度的候選藥物作用于腫瘤細胞系,一定時間后加入 CCK-8 溶液檢測細胞活力。通過計算藥物對細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50),評估藥物的抗腫瘤活性和毒性,為藥物研發(fā)提供重要數(shù)據(jù)支持,篩選出具有潛力的候選藥物。

  1. 細胞生物學研究:在細胞增殖、分化、凋亡等基礎(chǔ)細胞生物學研究中,該試劑盒用于實時監(jiān)測細胞狀態(tài)。如在干細胞分化研究中,使用 CCK-8 檢測不同誘導條件下干細胞的活力變化,判斷細胞是否成功分化以及分化過程中細胞活力的動態(tài)變化,為揭示細胞分化機制提供依據(jù) 。

  1. 毒理學研究:在評估化學物質(zhì)、環(huán)境污染物等對細胞的毒性作用時,CCK-8 法是常用的檢測手段。例如,檢測重金屬離子對肝細胞的毒性,將肝細胞暴露于不同濃度的重金屬溶液中,利用 CCK-8 試劑盒檢測細胞活力,確定重金屬的毒性劑量和作用機制,為環(huán)境安全評估和毒理學研究提供數(shù)據(jù)。

(四)使用方法與注意事項
  1. 使用方法

  • 細胞接種:將對數(shù)生長期的細胞消化后,用培養(yǎng)基調(diào)整細胞濃度,接種到 96 孔板中,每孔加入適量細胞懸液,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

  • 藥物處理(如需):根據(jù)實驗目的,向孔中加入不同濃度的藥物或處理因素,繼續(xù)培養(yǎng)一定時間。

  • CCK-8 檢測:向每孔加入適量 CCK-8 溶液,輕輕混勻后,將 96 孔板放回培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時(具體時間根據(jù)細胞類型和實驗條件確定)。

  • 吸光度測定:使用酶標儀在 450nm 波長處測定各孔的吸光度值,根據(jù)標準曲線計算細胞活力和細胞數(shù)量。

  1. 注意事項

  • 試劑儲存:CCK-8 試劑盒應避光保存于 4℃冰箱,避免反復凍融,否則會影響試劑活性。

  • 操作規(guī)范:實驗過程中應嚴格遵守無菌操作原則,避免污染。加入 CCK-8 溶液時,避免產(chǎn)生氣泡,以免影響吸光度測定。

  • 干擾因素:某些具有還原性的物質(zhì)可能會與 WST-8 發(fā)生反應,影響檢測結(jié)果,實驗前需評估樣品中是否存在此類干擾物質(zhì),并進行相應處理。

  • 對照設(shè)置:實驗中應設(shè)置空白對照(只含培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液)、陰性對照(正常培養(yǎng)的細胞)和陽性對照(已知具有細胞毒性或促進細胞生長作用的物質(zhì)處理的細胞),確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性 。

CCK-8 細胞活力檢測試劑盒憑借其操作簡便、靈敏度高、結(jié)果準確等優(yōu)勢,在生物技術(shù)多個領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展,其應用場景將進一步拓展,同時也將推動相關(guān)技術(shù)的持續(xù)創(chuàng)新和優(yōu)化 。



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