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低細(xì)胞毒性：由于其無法穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞，SafeGreen 對(duì)細(xì)胞的毒性顯著降低 。以 HeLa 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)為例，將 HeLa 細(xì)胞分別與 1X SYBR Safe、SafeGreen 和 SafeRed 孵育 30 分鐘后發(fā)現(xiàn)，SYBR Safe 可迅速進(jìn)入細(xì)胞并對(duì)細(xì)胞核染色，而 SafeGreen 和 SafeRed 無法穿透細(xì)胞膜與活細(xì)胞內(nèi)的 DNA 結(jié)合 。這表明 SafeGreen 在實(shí)驗(yàn)過程中不會(huì)對(duì)細(xì)胞的生理狀態(tài)產(chǎn)生明顯影響，為細(xì)胞水平的核酸研究提供了安全保障。
低致突變性：多項(xiàng)研究表明，SafeGreen 在致突變性測(cè)試中表現(xiàn)優(yōu)異。與具有強(qiáng)致突變性的 EB 不同，SafeGreen 不會(huì)誘導(dǎo)敘利亞地鼠胚胎（SHE）細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，也不會(huì)在人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物中誘導(dǎo)染色體畸變 。在標(biāo)準(zhǔn) Ames 測(cè)試中，與 EB 相比，SafeGreen 在幾種不同的 Salmonella typhimurium 菌株中的致突變效應(yīng)更低，為科研人員的長(zhǎng)期使用減少了健康隱患 。
清晰條帶顯示：SafeGreen 對(duì)核酸具有高度敏感性，能夠清晰地顯示核酸條帶。在瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中，無論是低濃度還是高濃度的核酸樣品，使用 SafeGreen 染色后，均可獲得條帶分離效果良好的凝膠圖像 。其靈敏度足以檢測(cè)到極微量的核酸，可與傳統(tǒng)高靈敏度染料相媲美，滿足如 PCR 產(chǎn)物鑒定、克隆與載體構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)中對(duì)核酸條帶精確觀察的需求 。
精準(zhǔn)定量基礎(chǔ)：憑借其與核酸結(jié)合后顯著的熒光變化，SafeGreen 為核酸定量分析提供了可靠基礎(chǔ)。在核酸定量實(shí)驗(yàn)中，熒光強(qiáng)度與核酸濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，科研人員可通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度，借助標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)推算核酸樣品的濃度，確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性 。
化學(xué)穩(wěn)定性：SafeGreen 在常見的實(shí)驗(yàn)條件下表現(xiàn)出出色的化學(xué)穩(wěn)定性。它與 TAE、TBE、RRB 等常用電泳緩沖溶液具有良好的兼容性 ，在不同緩沖體系中均能保持穩(wěn)定的染色性能，不會(huì)因緩沖液成分的差異而發(fā)生分解或失效。此外，SafeGreen 對(duì)溫度、pH 值等環(huán)境因素的變化具有一定耐受性，即使在實(shí)驗(yàn)操作過程中出現(xiàn)輕微的條件波動(dòng)，也能維持穩(wěn)定的染色效果 。
熒光穩(wěn)定性：該染料的熒光信號(hào)在一定時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定，不易發(fā)生淬滅現(xiàn)象。在凝膠成像過程中，即使長(zhǎng)時(shí)間曝光，SafeGreen 標(biāo)記的核酸條帶熒光強(qiáng)度也不會(huì)明顯減弱，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性 。這一特性使得科研人員在進(jìn)行多次成像分析或長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)，無需擔(dān)心熒光信號(hào)衰減對(duì)結(jié)果造成的干擾 。
無條帶扭曲現(xiàn)象：SafeGreen 分子結(jié)構(gòu)使其在采用膠染法進(jìn)行染色時(shí)，不會(huì)影響 DNA 條帶的遷移。與其他一些無毒核酸染料不同，即使在高濃度核酸樣品條件下，使用 SafeGreen 染色也不會(huì)出現(xiàn)因分子量大造成的前染條帶扭曲現(xiàn)象（即 “笑臉" 現(xiàn)象） 。這使得科研人員能夠準(zhǔn)確判斷核酸片段的分子量和遷移率，為核酸電泳結(jié)果的分析提供了可靠依據(jù) 。
多激發(fā)光源適用性：SafeGreen 可在 488nm 波長(zhǎng)下被藍(lán)光激發(fā)，適用于藍(lán)光切膠儀或掃描儀直接觀察，有效避免了傳統(tǒng)紫外激發(fā)對(duì)核酸和實(shí)驗(yàn)人員的潛在損傷 。同時(shí)，它也可被紫外激發(fā)，用于常規(guī)的紫外凝膠成像系統(tǒng)，為不同實(shí)驗(yàn)室設(shè)備配置提供了靈活的選擇，滿足多樣化的實(shí)驗(yàn)需求 。
膠染法操作步驟：在制備瓊脂糖凝膠時(shí)，將適量的 SafeGreen 核酸染料加入到熔化且冷卻至 50 - 60℃的瓊脂糖溶液中 。例如，每 50 mL 瓊脂糖溶液中可加入 5 μL 10,000× 濃度的 SafeGreen 染料儲(chǔ)液，充分混勻后倒入制膠模具中。待凝膠凝固后，將其放入電泳槽，加入適量電泳緩沖液（如 TAE 或 TBE 緩沖液），使其覆蓋凝膠表面 。將 DNA 樣品與上樣緩沖液混合后，用移液器小心地將樣品加入凝膠的加樣孔中，避免產(chǎn)生氣泡 。接通電源，根據(jù)核酸片段大小設(shè)置合適的電壓和電泳時(shí)間，一般電壓為 100 - 150V，時(shí)間為 30 - 60 分鐘不等 。電泳結(jié)束后，可使用藍(lán)光切膠儀或紫外凝膠成像系統(tǒng)對(duì)凝膠進(jìn)行觀察和拍照，此時(shí)可清晰看到被 SafeGreen 染色的核酸條帶 。
泡染法操作步驟：先進(jìn)行常規(guī)的核酸電泳實(shí)驗(yàn)，將 DNA 樣品在未添加染料的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳分離 。電泳結(jié)束后，將凝膠小心取出，放入含有 SafeGreen 染色液的容器中 。染色液可通過將 10 μL 10,000× 濃度的 SafeGreen 染料加入到 100 ml 1×TAE 或 0.5×TBE 緩沖液中配制而成 。確保凝膠浸沒在染色液中，在室溫下輕輕振蕩孵育 30 - 60 分鐘 。染色時(shí)間可根據(jù)凝膠厚度、瓊脂糖濃度以及核酸片段大小適當(dāng)調(diào)整，凝膠越厚、瓊脂糖濃度越高或核酸片段越大，所需染色時(shí)間越長(zhǎng) 。孵育結(jié)束后，直接使用藍(lán)光切膠儀或紫外凝膠成像系統(tǒng)對(duì)凝膠進(jìn)行觀察，無需額外的脫色步驟，即可觀察到清晰的核酸條帶 。
PCR 產(chǎn)物檢測(cè)：在 PCR 反應(yīng)體系中，可在反應(yīng)結(jié)束后直接加入適量 SafeGreen 染料 。將 PCR 產(chǎn)物與染料充分混合，然后取適量混合液點(diǎn)樣到瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分析 。通過觀察凝膠上條帶的有無和亮度，可判斷 PCR 反應(yīng)是否成功以及產(chǎn)物的相對(duì)含量 。
核酸文庫(kù)質(zhì)量控制：對(duì)于構(gòu)建的核酸文庫(kù)，如 DNA 文庫(kù)或 RNA 文庫(kù)，可使用 SafeGreen 對(duì)文庫(kù)中的核酸進(jìn)行染色檢測(cè) 。通過電泳分析染色后的核酸條帶分布情況，評(píng)估文庫(kù)的質(zhì)量，包括核酸片段的大小分布、濃度以及是否存在雜質(zhì)等 。在文庫(kù)篩選和后續(xù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用前，確保文庫(kù)的質(zhì)量符合要求 。
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