BD 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDB）正確儲存與使用指南
更新時(shí)間：2025-07-16 點(diǎn)擊次數(shù)：555
BD 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDB）應(yīng)儲存在干燥、陰涼、避光的環(huán)境中。過高的濕度可能導(dǎo)致培養(yǎng)基吸潮，影響其物理狀態(tài)和營養(yǎng)成分，增加微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)；高溫環(huán)境會加速培養(yǎng)基中成分的分解和變質(zhì)，破壞其營養(yǎng)結(jié)構(gòu)，降低培養(yǎng)基的質(zhì)量。而光照可能會使培養(yǎng)基中的某些成分發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，影響微生物的生長和培養(yǎng)效果 。因此，建議將其放置在專門的藥品儲存柜中，儲存溫度控制在 2 - 8℃為宜，避免與易揮發(fā)、有腐蝕性的化學(xué)試劑存放在一起，防止交叉污染。
在儲存過程中，要定期檢查 PDB 的包裝是否完整。瓶裝培養(yǎng)基需查看瓶蓋是否擰緊，有無裂縫或破損；袋裝培養(yǎng)基要檢查包裝是否密封，有無漏氣、破損現(xiàn)象。若發(fā)現(xiàn)包裝受損，應(yīng)立即停止使用，因?yàn)榘b破損會使培養(yǎng)基暴露在外界環(huán)境中，容易受到微生物污染和水分散失，無法保證培養(yǎng)效果，使用這樣的培養(yǎng)基可能會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確或微生物培養(yǎng)失敗。
嚴(yán)格遵守 PDB 的保質(zhì)期規(guī)定，在保質(zhì)期內(nèi)使用。不同規(guī)格和批次的培養(yǎng)基保質(zhì)期可能有所差異，使用前務(wù)必仔細(xì)查看產(chǎn)品標(biāo)簽上的生產(chǎn)日期和保質(zhì)期信息。臨近保質(zhì)期的培養(yǎng)基，其性能可能會有所下降，使用時(shí)需謹(jǐn)慎評估。對于超過保質(zhì)期的培養(yǎng)基，無論外觀是否有明顯變化，都不應(yīng)再使用，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果或微生物培養(yǎng)質(zhì)量。
培養(yǎng)基的復(fù)溫：從冰箱中取出 PDB 培養(yǎng)基后，不要立即打開包裝進(jìn)行使用，應(yīng)先將其放置在室溫環(huán)境下一段時(shí)間，使其溫度回升至接近室溫。這樣做可以避免因溫度驟變導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)冷凝水，影響微生物接種和生長，同時(shí)也有利于后續(xù)的溶解和分裝操作。
實(shí)驗(yàn)器具準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好無菌的培養(yǎng)皿、接種環(huán)、移液槍、槍頭、酒精燈等實(shí)驗(yàn)器具。所有器具都需經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌處理，如培養(yǎng)皿可采用高壓蒸汽滅菌法，在 121℃、103.4kPa 壓力下滅菌 15 - 20 分鐘；接種環(huán)和移液槍頭可使用干熱滅菌或濕熱滅菌的方式進(jìn)行滅菌，確保實(shí)驗(yàn)過程中不會引入雜菌，保證微生物培養(yǎng)的純度和準(zhǔn)確性。
溶解操作：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，準(zhǔn)確稱量所需量的 PDB 培養(yǎng)基干粉，放入無菌的容器中，加入適量的蒸餾水或去離子水。按照產(chǎn)品說明書的要求，使用磁力攪拌器或玻璃棒不斷攪拌，同時(shí)進(jìn)行加熱（可采用水浴加熱或電爐加熱，但需注意加熱溫度不宜過高，避免培養(yǎng)基成分被破壞），直至培養(yǎng)基溶解，形成均勻的液體。在加熱溶解過程中，要防止培養(yǎng)基溢出或燒焦，若使用電爐加熱，需有人全程值守，攪拌頻率適中，確保培養(yǎng)基受熱均勻。
分裝與滅菌：將溶解后的培養(yǎng)基趁熱分裝到無菌的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。分裝時(shí)要注意控制分裝量，避免過多或過少影響微生物的生長空間和營養(yǎng)供給。分裝完成后，立即對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，一般在 121℃、103.4kPa 壓力下滅菌 15 - 20 分鐘，以殺滅培養(yǎng)基中可能存在的微生物和芽孢，保證培養(yǎng)基的無菌狀態(tài)。滅菌結(jié)束后，讓培養(yǎng)基在滅菌鍋內(nèi)自然冷卻，待壓力降至零后，打開鍋蓋取出培養(yǎng)基，放置在無菌環(huán)境中備用。
無菌操作：在接種微生物時(shí)，必須嚴(yán)格遵循無菌操作原則。在超凈工作臺或無菌室內(nèi)進(jìn)行操作，提前打開紫外燈對操作區(qū)域進(jìn)行滅菌 30 分鐘左右，關(guān)閉紫外燈后，打開風(fēng)機(jī)，讓空氣流通一段時(shí)間，確保操作區(qū)域達(dá)到無菌狀態(tài)。操作過程中，雙手要用 75% 的酒精棉球擦拭消毒，接種環(huán)在使用前后都需在酒精燈火焰上灼燒滅菌，待冷卻后再進(jìn)行接種操作，避免高溫殺死接種的微生物。
接種方法選擇：根據(jù)不同的微生物種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選擇合適的接種方法，如劃線接種法、涂布接種法、傾注接種法等。劃線接種法適用于分離純化微生物，通過在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，使微生物逐漸稀釋，形成單個(gè)菌落；涂布接種法常用于將菌液均勻分布在培養(yǎng)基表面，適合于菌落計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)；傾注接種法則是將菌液與冷卻至適當(dāng)溫度的培養(yǎng)基混合后倒入培養(yǎng)皿中，適用于厭氧菌的培養(yǎng)等。
培養(yǎng)條件控制：接種后的培養(yǎng)基應(yīng)放置在適宜的培養(yǎng)環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。不同的微生物對培養(yǎng)溫度、濕度和時(shí)間的要求各不相同，需根據(jù)微生物的特性進(jìn)行調(diào)整。例如，真菌的培養(yǎng)溫度一般在 25 - 30℃，培養(yǎng)時(shí)間通常為 2 - 7 天；細(xì)菌的培養(yǎng)溫度和時(shí)間則因菌種而異，如大腸桿菌可在 37℃培養(yǎng) 18 - 24 小時(shí)。在培養(yǎng)過程中，要定期觀察微生物的生長情況，記錄菌落的形態(tài)、顏色、大小等特征，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題并進(jìn)行處理，如出現(xiàn)污染現(xiàn)象，應(yīng)立即停止培養(yǎng)并對相關(guān)器具和環(huán)境進(jìn)行消毒處理。
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